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通俗地讲， DNA 克隆就是把外源基因与克隆载体进行体外连接，然后再转化到宿主菌中进行克隆、筛选的技术，以此获得质粒重组体。
服务要求
1. 请以 Fax 或 E-mail 等形式告知我们服务的主要目的及具体要求。
2. 提供外源 DNA 的来源及背景资料。 DNA 来源包括： PCR 扩增产物； RT-PCR 扩增产物；从其他质粒上酶切 得到的 DNA 片段等。
3. 提供载体来源及背景资料。
4. 注明克隆使用的酶切位点以及是否需要平端连接等。
5. 有关实验材料的具体要求，详细情况请参考“客户常问的几个问题”。
操作程序
1. 具体联系方式请参考 “客户常问的几个问题 ” 。
2. 我们在收到实验样品及材料后，将根据具体实验方案开始工作。
3. 如果您提供模板后需闪晶公司进行 PCR 扩增时，我们将尽量采用高保真 DNA 聚合酶进行 PCR 反应。但不承 诺没有错配现象，不承诺测序结果与参考序列完全一致。
4. 在完成相应的克隆、 DNA 测序等工作后我们将为您提供一套完整的实验结果，其中包括：实验操作规程、 引物、克隆构建的质粒及含该质粒的菌体（穿刺菌），如其中含有测序内容则还包括打印的测序结果、测序彩色波形图等。
5. 一般情况下普通载体的克隆需 10 天左右时间。
全基因合成服务  |
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在我们的实验工作中，如果采用一般实验手段无法得到目的基因时，可以进行实验室人工合成。闪晶公司提供全基因合成服务，具体情况如下。
全基因合成服务要求
1. 请将您需要合成的基因全序列以 E-mail 或传真的形式告知闪晶公司的业务员或闪晶公司的技术员。
2. 请说明实验的具体要求，如：使用何种酶切位点进行克隆以及需克隆于何种载体等。
全基因合成操作程序
1. 我们将对您需要合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有重复序列。根据序列的具体情况设 计合成方案并通过业务员或技术员给您报价。
2. 在得到您认可后我们将立即进行单链 Oligo DNA 合成、 DNA 片段拼接等工作，然后把全长基因克隆于载体 中，再通过 DNA 测序确认合成基因的正确性。
3. 测序结果如果发现有 错误位点，我们会采取相应的技术手段进行修复校对，保证整个序列的正确性。
4. 提供实验结果：包括实验操作规程、测序结果、测序彩色峰图、含有合成基因的质粒及含该质粒的菌体( 穿刺菌 )等。免费提供密码子优化！！
E-mail:master@shinegene.org.cn 免费电话：8009881995 全基因合成业务诚征全国代理商！咨询电话：021-54460832
全基因合成收费标准 全基因合成订单下载
长度 |
价格 |
时间 |
<1000bp |
￥8.00/bp |
15个工作日 |
1000-3000bp |
￥10.00/bp |
40个工作日 |
通过实验方法可以有效地向目的基因片段中引入任何所需的 DNA 变异，包括碱基添加、删除、点突变等。
服务要求
1. 请您通过业务员或技术员提供需要进行突变基因的全部详细序列；突变前序列请标注为： Wild sequence ；突变后序列请标注为： Mut sequence 。
2. 请提供突变基因克隆操作的详细背景资料，例如使用何种限制酶酶切位点、克隆于何种载体等。
3. 请说明实验的具体要求，详细情况请参考 “客户常问的几个问题”。
操作程序
1. 具体联系方式请参考“客户常问的几个问题”。
2. 如您提供的模板序列为非闪晶公司的测序结果，我们将首先对模板进行测序并将与您沟通测序结果。
3. 根据突变方案设计合成突变引物，进行基因突变实验的 PCR 反应，克隆变异体。
4. 进行 DNA 测序验证突变序列的正确性。
5. 提供实验结果，包括实验操作规程、突变用引物、质粒变异体以及含有该质粒的菌种（穿刺菌）、测序结 果、测序彩色峰图等。
6. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通载体上的单点突变的时间约需 10 天左右。
收费标准
突变点 |
1个 |
2个 |
3个 |
3个以上 |
<1000bp |
￥1500 |
￥2500 |
￥3500 |
询价 |
1000-2000bp |
￥2000 |
￥3500 |
￥4500 |
询价 |
时间 |
20个工作日 |
25个工作日 |
30个工作日 |
协商 |
我们可以根据某基因的一段已知序列（或一段同源序列），利用 3' -RACE 方法获得该基因的 3' 端序列，或利用 5'-RACE 方法获得该基因的 5' 端序列。
服务要求
1. 请您提供新鲜的且尽量多的材料（各种材料的 RNA 提取量请参照“总 RNA 的提取” ) ，或直接提供纯化好的 总 RNA 。每次实验操作所需的 RNA 量为 1 ~ 5 m g ，如果您的实验需要进行多次 RACE 操作，则应视具体情况相应增加样品量。
2. 请通过 E-mail 提供已知部分的 cDNA 序列及方向。
3. 请提供尽可能详细的背景资料： RNA 来源、纯度、丰度、所扩增基因的估计长度、是否具有同源序列等。
4. 有关实验材料的具体要求，详细情况请参考“客户常问的几个问题”。
操作程序
1. 具体联系方式请参考“客户常问的几个问题”。
2. 设计引物通过 RT-PCR 对已知 cDNA 序列进行验证。
3. 验证成功后，根据 cDNA 序列设计引物进行 RACE 操作。
4. 扩增出来的片段克隆到普通载体中测序（或 PCR 产物直接测序 ) 。
5. 分析结果，根据您的要求决定是否继续设计引物进行下一次 RACE 操作。
6. 实验完成后，将为您提供完整的实验操作规程、实验报告、测序结果以及测序彩色峰图、引物、质粒以及含有该质粒的 菌种（穿刺菌）等。
某基因在生物体内是否表达，往往可以通过 RT-PCR 的方法进行定性检测。并以 b -Actin 或 GAPDH 等看家基因作内参照，对其表达量进行半定量分析或者实时荧光 PCR 全定量分析。
服务要求
1. 请您提供新鲜的且尽量多的材料（各种材料的 RNA 提取量请参照“总 RNA 的提取” ) ，或直接提供纯化好的 总 RNA （大于 5 m g/ 样品 ) 。
2. 请通过 E-mail 提供已知的全长基因序列。
3. 请提供尽可能详细的背景资料： RNA 来源、丰度等。
操作程序
1. 根据基因序列设计扩增目的基因以及看家基因的引物。
2. 提取 RNA ，通过 OD 值测定对 RNA 样品进行定量。
3. RT-PCR 扩增目的基因及看家基因。
4. 产物进行琼脂糖凝胶电泳，分析结果。
5. 实验完成后，提供完整的实验操作规程、实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。
总 RNA 是一种非常重要的实验材料。闪晶公司可以提供从多种材料中提取总 RNA 的服务。不同总 RNA 的提取种类的材料中提取的总 RNA 量不同，而且差异比较大，现就一般材料的总 RNA 提取情况列表如下：
不同样品 |
样品要求 |
起始量 |
得率 |
血液 |
新鲜摆渡或抗凝血 |
100ul |
0.1-0.3ug |
动物细胞 |
细胞悬液或收集的细胞 |
1 × 10 6 |
10ug |
动物组织 |
一般材料 |
100mg |
100ug |
植物 |
一般材料 |
100mg |
10ug |
说明：
1. 每种材料必须保证尽量新鲜。
2. 实验完成后，提供 RNA 样品、电泳照片、 OD 值测定结果等。
闪晶公司可以从多种材料中提取基因组 DNA ，不同种类的材料中提取的 DNA 量不同，而且差异也比较大，现就一般材料的基因组 DNA 提取情况列表如下：
不同样品 |
样品要求 |
起始量 |
得率 |
血液 |
新鲜摆渡或抗凝血 |
100ul |
0.1-0.3ug |
动物细胞 |
细胞悬液或收集的细胞 |
1 × 10 6 |
10ug |
动物组织 |
一般材料 |
100mg |
100ug |
植物 |
一般材料 |
100mg |
10ug |
细菌 |
OD 600 ＝ 1.5 的大肠杆菌培养液 |
1ml |
1-2ug |
说明：
1. 每种材料必须保证尽量新鲜。
2. 实验完成后，提供 DNA 样品、电泳照片、 OD 值测定结果等。
样品要求：
请您提供甘油或穿刺菌种，并说明质粒大小、抗性、拷贝数等背景资料。
提供结果：
OD260/280>1.8 的质粒、穿刺菌种、电泳照片。
样品要求：
请您提供质粒，并说明质粒大小、浓度、抗性、拷贝数等背景资料。
提供结果：
涂布后的平板
质谱分析技术服务
闪晶生物最新引进美国安捷伦公司的液相色谱质谱联用仪。为充分实现资源共享，与国内同行共同推动我国多肽化学、药物分子、生命科学事业的发展，现对外开展质谱分析服务。
设备仪器：
美国安捷伦公司 Agilent 1100 型号的液相色谱仪，MS为美国热电公司的TSQ型号质谱仪；质谱仪采用ESI（电喷雾电离）离子源，MS/MS 串连四极杆分析器。可在线检测极性有机化合物、核酸、多肽、小分子蛋白质及其化学修饰产品的实际分子量，并对送检样品进行分子量鉴定，纯度及修饰效果分析。
测试范围：
多肽、蛋白质的电喷雾质谱分子量测定以及天然产物分子、生物大分子、有机分子的质谱测试和研究
送检样品要求：
样品应尽量不含盐份、离子表面活性剂、去垢剂及一些难挥发性盐。如果是干粉，提供200ug,如果是溶液请提供ug/ul的浓度且体积在200ul以内；未知可否做质谱检测的样品可与我们的工作人员联系以便提高检测效率。（送样单请附带检测样品的品名及精确计算分子量）
检测报告：
从收到样品起1-2个工作日内可给出样品的检测报告，以电子邮件的形式发给您并附带检测结果分析。
收费标准：
多肽、核酸、有机化合物及其化学修饰产品做分子量鉴定及纯度分80元/条，量大更优惠。小分子蛋白质及其化学修饰产品（FW 50KD以内）分子量鉴定及纯度分析70元/条。
联系方法：
电话：021－54460831 54460832
E-mail:master@shinegene.org.cn http://www.shinegene.org.cn
质谱分析送样表
闪晶公司有扩增性能好、保真性能强的各种 PCR 反应试剂，可满足您对各种模板进行 PCR 扩增的要求。
样品要求：
请您提供模板（质粒、基因组 DNA 、 PCR 产物等） 10 ml 以上（标明浓度 ) 、上下游引物（通常提供 0.2OD 以上 ) 、扩增产物的用途等。
提供结果：
PCR 扩增产物、电泳照片
PCR 条件 |
反应体系 |
时间 |
无需摸索条件 |
50ul |
1-2 天 |
需要摸索条件 |
50ul |
3-4 天 |
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差减杂交PCR |
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差减杂交(Subtractive hybridization)的原理非常简单，首先将RNA反转录为双链cDNA，称为tester(含有目的基因)；对照RNA(不含目的基因)同样处理，产生cDNA为driver，微量的tester和过量的driver在合适的条件下杂交，tester中和driver中相同的基因杂交子就被除去，在tester中独特的基因被富集，通过PCR方法扩增出来，得到差减庫，扩增产物可以通过T载体直接克隆和测序分析。在探讨两个相关组织或两个关联过程中基因表达差异的情况，通过该方法可以获得某些基因在某一样品中表达，而在对应的样品中不表达或表达量很低。
该方法也可以用于基因组特异片段的筛选，差别在于前者用mRNA为实验材料，后者用基因组DNA或其它可比样品的DNA为材料，两者的后半部分实验内容完全相同，前者得到的主要是差异表达的基因，后者得到的主要是差异片段。
客户需提供两个样品确实存在显著差异的证据，并告知打算得到哪个样品中被上调或下调的基因。如果同时想知道上调和下调的基因，则相当于两个服务，价格加倍。
实验结束后我们会提供筛选到的含有差异基因的质粒，用两个样品制备的cDNA制备的探针对筛选到的差异克隆进行Southern鉴定的图片一幅，以及简明实验步骤。
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免疫印迹技术服务(Western Blotting)
免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
闪晶生物为您提供全套免疫印迹(Western blotting)技术服务和相关试剂耗材。主要实验步骤如下：
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蛋白质抽提
2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。
3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和生物素标记的蛋白质分子量标准分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。
4. 蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜,按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。
5. 膜的封闭和抗体孵育
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膜在5％脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
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封闭过的膜加入一级抗体室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。
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加入HRP标记的二级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。
6. 结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件，并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
7. 数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8. 提供实验报告，包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关图表。
Western Blot相关的试剂和耗材请访问如下网址：
http://www.shinegene.org.cn/service/westernblot.html
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