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蛋白质印迹 客户常问的几个问题


siRNA/shRNA质粒载体构建技术服务

RNAi (RNAinterference, RNA干扰)技术,即将与内源 mRNA 编码区同源的小片段(19 -23bp)外源双链 RNA(double s`tranded RNA )导入细胞中,通过一系列细胞内反应引发细胞中相应 mRNA 的降解,从而导致特定基因表达沉默的一种技术。RNAi的作用提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段,有助于研究该基因在生物模型系统中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段。

基本原理示意图


siRNA/shRNA构建技术服务

本公司提供siRNA 载体的构建服务,siRNA 载体可以在细胞内直接转录出shRNA ,其干扰效果等同于siRNA ,而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息,包括基因的 mRNA 序列,Genbank Accession No. 和所属物种,本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列,在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体。可以为您节省大量的时间与精力。此方法是多种siRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。

闪晶生物siRNA载体构建服务程序:
1. siRNA表达载体的选用:
本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记,可以建立稳定表达系,同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因,可以无限扩增。
2. 设计siRNA靶序列
A 、根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列,靶序列一般为19 - 21nt 长。
B 、对于每条选定的siRNA 靶序列,设计 siRNA 正义链和反义链,以 loop(9nt) 相连,称为 shRNA(short hairpin RNA)。
C、阴性对照的设立.
3. 合成模板:
合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链,退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点,同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点,可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。
4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后,1 %琼脂糖凝胶电泳,回收线性载体。
5. 连接与转化:
把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶,插入片断与载体的摩尔比约为 3 : 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌,在LB Amp培养基上涂板,37 ℃培养过夜。
6. PCR 鉴定
7. 测序鉴定
8.柱抽提阳性克隆载体并定量。

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个数

价格(¥)

时间

1-3个siRNA表达载体构建

1800.00/个

14个工作日

4-10个siRNA表达载体构建

1500.00/个

20个工作日

10个以上

协商

协商

闪晶生物同时提供腺病毒和慢病毒载体的构建服务,5000.00元/个.
腺病毒慢病毒构建包装扩增纯化服务
联系电话:021-54460831-11 E-mail:master@shinegene.org.cn shinegene@vip.163.com 乘车路线:火车站坐1号地铁到终点,然后换乘5号线到北桥站即可。


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产品编号

产 品 名 称

中 文 名 称

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即用型抗生素溶液:

产品名称

中文名称

溶液浓度

包装

单价(元)

Amphotericin B

两性霉素B溶液

5mg/ml

2*10ml

240.00

Ampicillin, sodium salt

氨苄青霉素钠溶液

10mg/ml

2x10ml

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G418 Sulfate (Geneticin)

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40mg/ml

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硫酸庆大霉素

50mg/ml

2x10ml

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潮霉素B溶液

50mg/ml

2x1ml

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