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技术服务
荧光定量PCR 多肽合成
DNA测序服务 探针合成服务(TaqMan/MGB/Beacon)
DNA克隆-基因克隆-亚克隆 全基因合成 (体验价1.20/bp)
基因突变 蛋白表达纯化
基因表达水平的检测 总RNA的提取
质粒提取质粒转化 基因组DNA的提取
质谱分析 PCR 扩增
蛋白质印迹 客户常问的几个问题

SiRNA构建 

 
 
DNA克隆
通俗地讲, DNA克隆(基因克隆-亚克隆)就是把外源基因与克隆载体进行体外连接,然后再转化到宿主菌中进行克隆、筛选的技术,以此获得质粒重组体。

服务要求
1. 请以 Fax 或 E-mail 等形式告知我们服务的主要目的及具体要求。
2. 提供外源 DNA 的来源及背景资料。 DNA 来源包括: PCR 扩增产物; RT-PCR 扩增产物;从其他质粒上酶切 得到的 DNA 片段等。
3. 提供载体来源及背景资料。
4. 注明克隆使用的酶切位点以及是否需要平端连接等。
5. 有关实验材料的具体要求,详细情况请参考“客户常问的几个问题

操作程序
1. 具体联系方式请参考 客户常问的几个问题
2. 我们在收到实验样品及材料后,将根据具体实验方案开始工作。
3. 如果您提供模板后需闪晶公司进行 PCR 扩增时,我们将尽量采用高保真 DNA 聚合酶进行 PCR 反应。但不承 诺没有错配现象,不承诺测序结果与参考序列完全一致。
4. 在完成相应的克隆、 DNA 测序等工作后我们将为您提供一套完整的实验结果,其中包括:实验操作规程、 引物、克隆构建的质粒及含该质粒的菌体(穿刺菌),如其中含有测序内容则还包括打印的测序结果、测序彩色波形图等。
5. 一般情况下普通载体的克隆需 10 天左右时间。价格:600.00-3000.00不等。

全基因合成服务
在我们的实验工作中,如果采用一般实验手段无法得到目的基因时,可以进行实验室人工合成。闪晶公司提供全基因合成服务,具体情况如下。

全基因合成服务要求
1. 请将您需要合成的基因全序列以 E-mail 或传真的形式告知闪晶公司的业务员或闪晶公司的技术员。
2. 请说明实验的具体要求,如:使用何种酶切位点进行克隆以及需克隆于何种载体等。

全基因合成操作程序
1. 我们将对您需要合成的基因全序列进行分析,检查基因内部是否含有重复序列。根据序列的具体情况设 计合成方案并通过业务员或技术员给您报价。
2. 在得到您认可后我们将立即进行单链 Oligo DNA 合成、 DNA 片段拼接等工作,然后把全长基因克隆于载体 中,再通过 DNA 测序确认合成基因的正确性。
3. 测序结果如果发现有 错误位点,我们会采取相应的技术手段进行修复校对,保证整个序列的正确性。
4. 提供实验结果:包括实验操作规程、测序结果、测序彩色峰图、含有合成基因的质粒及含该质粒的菌体( 穿刺菌 )等。免费提供密码子优化!!
E-mail:master@shinegene.org.cn 免费电话:8009881995 全基因合成业务诚征全国代理商!咨询电话:021-54460832

全基因合成收费标准 全基因合成订单  全基因合成分析软件 蛋白表达纯化 多克隆抗体制备

长度
价格
时间
<2000bp
¥1.20/bp
15个工作日
2000-3000bp
¥1.60/bp
40个工作日

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基因突变
定点突变 亚克隆
通过实验方法可以有效地向目的基因片段中引入任何所需的 DNA 变异,包括碱基添加、删除、点突变等。

服务要求
1. 请您通过业务员或技术员提供需要进行突变基因的全部详细序列;突变前序列请标注为: Wild sequence ;突变后序列请标注为: Mut sequence 。
2. 请提供突变基因克隆操作的详细背景资料,例如使用何种限制酶酶切位点、克隆于何种载体等。
3. 请说明实验的具体要求,详细情况请参考 客户常问的几个问题

操作程序
1. 具体联系方式请参考“客户常问的几个问题
2. 如您提供的模板序列为非闪晶公司的测序结果,我们将首先对模板进行测序并将与您沟通测序结果。
3. 根据突变方案设计合成突变引物,进行基因突变实验的 PCR 反应,克隆变异体。
4. 进行 DNA 测序验证突变序列的正确性。
5. 提供实验结果,包括实验操作规程、突变用引物、质粒变异体以及含有该质粒的菌种(穿刺菌)、测序结 果、测序彩色峰图等。
6. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通载体上的单点突变的时间约需 10 天左右。

收费标准

突变点
1个
2个
3个
3个以上
<1000bp
¥800
¥1200
¥1500
询价
1000-2000bp
¥1000
¥1500
¥2000
询价
时间
20个工作日
25个工作日
30个工作日
协商
5'-RACE 3'-RACE
我们可以根据某基因的一段已知序列(或一段同源序列),利用 3' -RACE 方法获得该基因的 3' 端序列,或利用 5'-RACE 方法获得该基因的 5' 端序列。

服务要求
1. 请您提供新鲜的且尽量多的材料(各种材料的 RNA 提取量请参照“总 RNA 的提取” ) ,或直接提供纯化好的 总 RNA 。每次实验操作所需的 RNA 量为 1 ~ 5 m g ,如果您的实验需要进行多次 RACE 操作,则应视具体情况相应增加样品量。
2. 请通过 E-mail 提供已知部分的 cDNA 序列及方向。
3. 请提供尽可能详细的背景资料: RNA 来源、纯度、丰度、所扩增基因的估计长度、是否具有同源序列等。
4. 有关实验材料的具体要求,详细情况请参考“客户常问的几个问题

操作程序
1. 具体联系方式请参考“客户常问的几个问题
2. 设计引物通过 RT-PCR 对已知 cDNA 序列进行验证。
3. 验证成功后,根据 cDNA 序列设计引物进行 RACE 操作。
4. 扩增出来的片段克隆到普通载体中测序(或 PCR 产物直接测序 ) 。
5. 分析结果,根据您的要求决定是否继续设计引物进行下一次 RACE 操作。
6. 实验完成后,将为您提供完整的实验操作规程、实验报告、测序结果以及测序彩色峰图、引物、质粒以及含有该质粒的 菌种(穿刺菌)等。

基因表达水平的检测
某基因在生物体内是否表达,往往可以通过 RT-PCR 的方法进行定性检测。并以 b -Actin 或 GAPDH 等看家基因作内参照,对其表达量进行半定量分析或者实时荧光 PCR 全定量分析。

服务要求
1. 请您提供新鲜的且尽量多的材料(各种材料的 RNA 提取量请参照“总 RNA 的提取” ) ,或直接提供纯化好的 总 RNA (大于 5 m g/ 样品 ) 。
2. 请通过 E-mail 提供已知的全长基因序列。
3. 请提供尽可能详细的背景资料: RNA 来源、丰度等。

操作程序
1. 根据基因序列设计扩增目的基因以及看家基因的引物。
2. 提取 RNA ,通过 OD 值测定对 RNA 样品进行定量。
3. RT-PCR 扩增目的基因及看家基因。
4. 产物进行琼脂糖凝胶电泳,分析结果。
5. 实验完成后,提供完整的实验操作规程、实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。

总 RNA 的提取
总 RNA 是一种非常重要的实验材料。闪晶公司可以提供从多种材料中提取总 RNA 的服务。不同总 RNA 的提取种类的材料中提取的总 RNA 量不同,而且差异比较大,现就一般材料的总 RNA 提取情况列表如下:

不同样品

样品要求

起始量

得率

血液

新鲜摆渡或抗凝血

100ul

0.1-0.3ug

动物细胞

细胞悬液或收集的细胞

1 × 10 6

10ug

动物组织

一般材料

100mg

100ug

植物

一般材料

100mg

10ug

说明:
1. 每种材料必须保证尽量新鲜。
2. 实验完成后,提供 RNA 样品、电泳照片、 OD 值测定结果等。

基因组 DNA 的提取
闪晶公司可以从多种材料中提取基因组 DNA ,不同种类的材料中提取的 DNA 量不同,而且差异也比较大,现就一般材料的基因组 DNA 提取情况列表如下:

不同样品

样品要求

起始量

得率

血液

新鲜摆渡或抗凝血

100ul

0.1-0.3ug

动物细胞

细胞悬液或收集的细胞

1 × 10 6

10ug

动物组织

一般材料

100mg

100ug

植物

一般材料

100mg

10ug

细菌

OD 600 = 1.5 的大肠杆菌培养液

1ml

1-2ug

说明:
1. 每种材料必须保证尽量新鲜。
2. 实验完成后,提供 DNA 样品、电泳照片、 OD 值测定结果等。

质粒提取
样品要求:
请您提供甘油或穿刺菌种,并说明质粒大小、抗性、拷贝数等背景资料。

提供结果:
OD260/280>1.8 的质粒、穿刺菌种、电泳照片。

质粒转化
样品要求:
请您提供质粒,并说明质粒大小、浓度、抗性、拷贝数等背景资料。

提供结果:
涂布后的平板


PCR 扩增
闪晶公司有扩增性能好、保真性能强的各种 PCR 反应试剂,可满足您对各种模板进行 PCR 扩增的要求。

样品要求:
请您提供模板(质粒、基因组 DNA 、 PCR 产物等) 10 ml 以上(标明浓度 ) 、上下游引物(通常提供 0.2OD 以上 ) 、扩增产物的用途等。

提供结果:
PCR 扩增产物、电泳照片

PCR 条件

反应体系

时间

无需摸索条件

50ul

1-2 天

需要摸索条件

50ul

3-4 天

 

差减杂交PCR

差减杂交(Subtractive hybridization)的原理非常简单,首先将RNA反转录为双链cDNA,称为tester(含有目的基因);对照RNA(不含目的基因)同样处理,产生cDNA为driver,微量的tester和过量的driver在合适的条件下杂交,tester中和driver中相同的基因杂交子就被除去,在tester中独特的基因被富集,通过PCR方法扩增出来,得到差减庫,扩增产物可以通过T载体直接克隆和测序分析。在探讨两个相关组织或两个关联过程中基因表达差异的情况,通过该方法可以获得某些基因在某一样品中表达,而在对应的样品中不表达或表达量很低。
该方法也可以用于基因组特异片段的筛选,差别在于前者用mRNA为实验材料,后者用基因组DNA或其它可比样品的DNA为材料,两者的后半部分实验内容完全相同,前者得到的主要是差异表达的基因,后者得到的主要是差异片段。

客户需提供两个样品确实存在显著差异的证据,并告知打算得到哪个样品中被上调或下调的基因。如果同时想知道上调和下调的基因,则相当于两个服务,价格加倍。
实验结束后我们会提供筛选到的含有差异基因的质粒,用两个样品制备的cDNA制备的探针对筛选到的差异克隆进行Southern鉴定的图片一幅,以及简明实验步骤。


 

 

 

 

 


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