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蛋白质印迹 客户常问的几个问题


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蛋白表达与纯化技术服务 --最低3000.00/蛋白,无风险!

步骤1. 目标基因全基因合成:

  1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因,我们免费提供给客户。
  2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化,密码子优化
  3. 合成设计好的基因序列。

提供给客户:目标基因(在T载体或常规穿梭载体上)及测序报告。
价格:3.80元/碱基,如果客户直接提供构建好的质粒,则免去这部分费用.
时间:2~3周,根据基因的大小而定.详见全基因合成服务
步骤2. 目标基因亚克隆:

  1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
  2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
  3. 测序验证构建质粒的准确性。
  4. 闪晶生物免费提供如下表达载体:

Expression Vector

Promoter

Tag

pET3a, pET11a, pET24a

T7/ac

None or T7 Tag

pET32a

T7/ac

TRX & HIS

pET41a

T7/ac

GST & HIS

pET22b, pET25b, pET26b

T7/ac

Secret

pET28a, pET15b, pRSETb

T7/ac

HIS

pET50b, pET43a

T7/ac

Nus, HIS

pPEPTIDE

T7/ac

HIS

pMAL-c2x

T7/ac

MBP

pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P

T7/ac

GST

pQE30

T5

HIS

pTrcHisB

Trc

T7, HIS

pTWIN

T7/ac

Intein, CBD

pBV220

PRPL

None

提供给客户:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
价格:免费 
时间:1-2周
步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选:

  1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
  2. 将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
  3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
  4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
  5. 可提供表达菌株:DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。

提供给客户:重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
价格:免费
时间:1周
步骤4. 目标蛋白表达及纯化:

  1. 摇瓶培养1L重组细菌,诱导表达目标蛋白。
  2. 通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
  3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签,再纯化获得所需的目标蛋白(可选,构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点)。
  4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
  5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

提供给客户:纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告。
价格:
1. 如果目标蛋白含有亲和标签(His-tag or GST-tag)
5,000元(目标蛋白纯度>80%,不切除标签)
5,500元(目标蛋白纯度>90%,不切除标签)
6,000元(目标蛋白纯度>80%,切除标签)
6,500元(目标蛋白纯度>90%,切除标签)
2. 如果目标蛋白不含有亲和标签
8,000元(目标蛋白纯度>80%)
9,000元(目标蛋白纯度>90%)
3. 如果没有获得目标蛋白,则不收取任何费用(仅限客户直接提供构建好的质粒时)。

时间:2~3周, 蛋白表达订单下载
备注:
1. 因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同,我们最终根据实际情况将给客户提供最少1mg,最多10mg的目标蛋白,所收取的费用是相同的。
2. 我们提供的最终产品一般为保存于常规的缓冲液(Tris-HCl,PBS或乙酸-乙酸钠缓冲液)中蛋白质溶液,并且其中不含有尿素或盐酸胍等变性剂。
3. 每次Western blot检测最多7个样品,因为要加入阳性对照,阴性对照以及Marker。本步骤只包含一次免费检测,如果需要更多次检测则费用为1500/。我们可以免费为客户提供抗His-tag的一抗,如果客户需要使用其他一抗,则需要客户提供。详见 Western Blot 检测服务.

其它相关技术服务
多克隆抗体制备服务
荧光定量PCR检测服务
多肽合成服务
ELISA检测服务

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