细胞培养服务

服务内容:

1.培养大量状态良好的细胞用于后续实验。
2.负责将客户所购买的细胞冻存保种与本实验室,实验完成后客户可以要求回寄细胞。

客户要求及实验周期
1.客户购买细胞邮寄与我们培养
客户必须提供状态良好的细胞我们才能够顺利快速地进行实验。因为在邮寄过程中细胞受温度与营养缺失等因素影响很大,收到细胞时很可能细胞已经全部死亡或已经污染,这样需要客户再次邮寄细胞,邮寄细胞在三次以内。
2.我们也可以为客户代为购买细胞并且提供冻存保种服务,客户需要随时邮寄。
3.如要培养的为具有确定目的基因的细胞株,需要提供其中相关目的基因的信息。收到细胞后我们也会及时检测目的基因表达情况,如果没有目的基因表达客户需要重新提供细胞,出现此情况实验推后我们不负相关责任。
4.客户邮寄细胞时需一并提供细胞培养条件及相关注意事项。
5.培养周期在3-7天(视细胞类型及生长情况而定)。

MTT实验技术服务
MTT方法简介:
四甲基偶氮唑盐比色法(MTT方法),是通过快速简便的颜色反应来检测细胞存活数量。其原理是MTT可作为哺乳类动物细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时,线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成蓝紫色的针状甲瓒(Formazan)结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜(DMSO)溶解,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其吸光度OD值,OD值的高低可间接反映活细胞的数量及其活性。

目前MTT法常用于以下几个方面的研究:
1、检测细胞活性:常作为细胞毒性试验的一种方法。
2、体外药物敏感实验:该方法简便、经济、快速,重复性好,所需的细胞数较少,没有放射性,目前广泛的用于临床前的抗癌药物的筛选研究。
3、一些细胞因子活性的研究

基本实验步骤:
(1)将对数生长期细胞用胰酶消化后配制成浓度为1-10×104个/ml的细胞悬液,按1000-10000个细胞/孔接种于96孔板,每孔加100μl。
(2)将平板置37℃、5%CO2湿度培养箱中24小时后,加入含有不同浓度受试样本的培养液100μl,每个样本不同浓度设平行的三个孔,对照组加不含样本的培养液100μl,再放入培养箱中孵育24-72小时.
(3)用快速翻板法倒掉培养液,每孔加入用无血清1640按5mg/ml新鲜配制的MTT溶液100μl,温育4小时,使MTT还原为甲瓒,再次倒掉上清液,每孔加DMSO(二甲基亚砜)200μl,用平板摇床摇匀后,使用酶标仪测定光密度值(OD)(检测波长570nm),以溶剂对照处理细胞为对照组,按下述公式计算化合物对细胞的抑制率,并按中效方程计算半数抑制浓度IC50。

客户方需提供:
样本描述,相关的实验设计内容如细胞类型,作用时间和样本浓度等。

实验周期与费用:
   实验费用以样本数和细胞株的种类数目为单位计算,实验周期为20个工作日,公司将在材料和预付的实验经费全部到位的工作日后30个工作日之内提交实验结果。

细胞转染服务

技术简介:
常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染,外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。
   转染技术的选择对转染结果影响也很大,许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测时间等。

技术服务:
磷酸钙转染
磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法,磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入靶细胞,被转染的DNA可以整合到靶细胞的染色体中从而产生有不同基因型和表型的稳定克隆。这种方法首先由Graham和van der Ebb使用,后由Wigler修改而成。可广泛用于转染许多不同类型的细胞,不但适用于短暂表达,也可生成稳定的转化产物。

该法不适用于原代细胞(所需的DNA浓度较高),操作简便但重复性差。在实验中使用的每种试剂都必须小心校准,保证质量,甚至偏离最优条件十分之一个pH都可能导致磷酸钙转染的失败。而且对于有些细胞不适用。

脂质体转染
脂质体为人工膜泡,可作为体内,体外物质转送载体。将需转移的DNA或RNA包裹于质脂体,由于质脂体具有磷脂双层与胞膜相似,因此,可与细胞膜融合,将DNA转入宿主细胞。
影响转染效率差异的主要原因是细胞系间个体的差异,有的细胞系细胞膜通透性较好,质脂体复合物较容易进入细胞,转染效率就高。又有的细胞系本生就不容易被转染。其次脂类与DNA形成易于转染结构的特性存在负面效应。其中主要的问题是毒性,表现为细胞聚集在一起,从壁上脱落。另为脂质体转染易于受到血清中的脂肪与脂蛋白以及细胞外基质中带店成分,如硫酸软骨素等干扰引起细胞死亡从而影响转染效率。

客户方需提供:
1.生长状况良好的宿主细胞株,一并提供细胞特性,培养条件及相关注意事项。
2.我们也可以为客户代为购买细胞并且提供冻存保种服务,客户需要随时邮寄。
3.提供质粒,并说明质粒大小,浓度,抗性,拷贝数等相关背景资料。
腺病毒包装

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
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